张艳妮，熊英，龚甜，李健雄，施勇，徐刚
（江西省疾病预防控制中心，江西 南昌 330029）
腹泻通常是指一天内大便次数大于3 次且有性状改变的消化道综合征，一般可由多种因素、多种病原引起；
是全球重要的公共卫生问题之一[1]。在我国儿童腹泻是一种常见疾病，其发病率几次于呼吸道感染类疾病[2]。引起儿童腹泻的常见病毒有轮状病毒、诺如病毒、肠道腺病毒、星状病毒等。本研究通过对2010 年5 月至2021 年4 月在江西省儿童医院采集的2 301 份腹泻患儿的标本，采用Real-timePCR 和RT-PCR 等方法轮状病毒、诺如病毒、腺病毒、星状病毒等腹泻相关病毒的检测，了解南昌市病毒性腹泻的病原体及其流行特征，为南昌市病毒性腹泻的预防提供数据支撑。
1.1 标本 根据《腹泻症候群监测技术方法》里关于腹泻病例的定义，在江西省儿童医院采集每日排便3 次以上且粪便性状有明显改变门诊腹泻患儿的粪便标本，于-80℃保存。
1.2 方法
1.2.1 标本处理 取15 mL 的离心管，加入4.5 mL的PBS，取0.5 g 的标本，用震荡器震荡10 min，制成10%的混悬液，再3 000 rpm 离心10 min，取200 ul 上清提核酸，其余上清装入冻存管于-80℃保存备用。
1.2.2 病毒检测 上清采用GIAGEN 公司的mini kit 试剂盒提取核酸，提取方法参考试剂盒说明书；
8 种病毒检测方法参考 《腹泻症候群监测技术方法》。
1.3 统计学分析 所采集的标本按照患儿年龄进行分组，0～6 月、6～12 月、1～2 岁、2～3 岁、3～4 岁、4～5 岁共6 组进行统计分析；
数据采用Excel 2007软件进行数据统计处理，用SPSS 21 软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。
2.1 基本情况 2010 年5 月至2021 年4 月共采集2 301 份腹泻患儿标本，其中男性患儿1 537 例，女性患儿764 例，男女患儿的比例为2.01:1。在2010年至2018 年的监测中，腹泻标本的阳性率总体呈现逐年下降趋势，由2010 年最高61.11%下降至2017 年19.74%；
见图1。
图1 2010 年5 月至2021 年4 月各年标本检测阳性率分布
2.2 病毒性腹泻病原普构成 2 301 份腹泻患儿标本，898 份标本阳性，总阳性率为39.03%（898/2 301），其中混合感染130 份，占14.48%（130/898）。A 组轮状病毒共检出阳性498 份，阳性率为21.64%（498/2 301）；
B 组轮状病毒共检出阳性19份，阳性率为0.90%（19/2 102）；
C 组轮状病毒共检出阳性13 份，阳性率为0.62%（13/2 102）；
诺如病毒GI 共检出阳性6 份，阳性率为0.26%（6/2 301）；
诺如病毒GII 共检出阳性260 份，阳性率为11.30%（260/2 301）；
扎如病毒共检出阳性18 份，阳性率为0.78%（18/2 301）；
腺病毒病毒共检出阳性156 份，阳性率为6.78%（156/2 301）；
星状病毒共检出阳性65 份，阳性率为2.82%（65/2 301）。
2.3 7 种病毒分别与性别、年龄、季节单因素分析A 组轮状病毒、诺如病毒、腺病毒、星状病毒、扎如病毒、B 组轮状病毒和C 组轮状病毒分别于性别、年龄、季节单因素关系分析，具体见表1—2。
2.3.1 A 组轮状病毒 由表1 可以看到，轮状病毒的感染与年龄和季节有关系，与性别没有关系。与其他任意一年龄组相比，1～2 岁儿童是A 组轮状病毒易感人群（P＜0.001），感染率高达29.84%；
冬季是A 组轮状病毒的高发 （P＜0.001），阳性率为43.2%，夏季的阳性率最低（9.44%）。
2.3.2 诺如病毒 由表1 可以看到，诺如病毒的感染与性别、年龄和季节均存在相关性。男性的感染率（13.21%）明显的高于女性（8.25%）（P＜0.001）；
与其他任意一年龄组相比，1～2 岁组诺如病毒的阳性率最高为15.48%（P＜0.001）；
夏季是诺如病毒高发（P＜0.001），阳性率为16.20%。诺如病毒进行了分型，其中GI 为6 例，GII 为259 例，诺如病毒GII的构成比97.74%，为诺如病毒流行的优势基因型。
表1 A 组轮状病毒和诺如病毒感染因素的单因素分析
2.3.3 腺病毒 腺病毒的感染与性别和年龄均没有关系，只与季节有关系。春季是腺病毒的高发季节（P＜0.05）,检出率高达9.11%。
2.3.4 星状病毒 星状病毒的感染与性别和年龄均没有关系，只与季节有关系。冬季是星状病毒的高发季节（P＜0.001），检出率高达6.67%，夏季检出率最低为0.89%。
2.3.5 扎如病毒 扎如病毒的感染与性别和年龄均没有关系，只与季节有关系。秋季是扎如病毒的高发季节（P＜0.05），检出率最高1.62%。
2.3.6 B 组轮状病毒和C 组轮状病毒 B 组轮状病毒感染与性别、年龄和季节均没有关系。C 组轮状病毒感染与性别没有关系。与其他年龄组相比，3岁年龄组的检出率最高3.28%，在4 岁年龄组未检出C 组轮状病毒。夏季是C 组轮状病毒的高发季节（P＜0.05），检出率最高1.36%。
2.4 监测各年份病原普构成 由连续11 年的监测分析得知，引起5 岁以下儿童的腹泻主要病原体是A 组轮状病毒和诺如病毒，但是每年的病原普构成又存在一定的差异；
见图2。A 组轮状病毒和诺如病毒在2010 至2014 年所占的比例别为：2010 年54.55% 和39.23%、2011 年53.85% 和30.07%、2012 年 56.72% 和 32.84%、2013 年63.83%和18.08%、2014 年54.05%和35.13%，都是当年引起儿童腹泻的主要病原体；
在2015 年，虽然A 组轮状病毒仍然是主要病原体，但星状病毒所占的比例却和诺如病毒相同，也是当年引起腹泻的主要病原体。而在2016 年，扎如病毒则的检出率比A 组轮状病毒和诺如病毒都高，则成为当年的主要病原体。2019 年腺病毒的检出率明显高于A 组轮状病毒，诺如病毒和腺病毒则是引起腹泻的主要病原体。
图2 2010.5 至2021.4 各年腹泻病原普构成
表2 腺病毒、星状病毒、扎如病毒和B 组、C 组轮状病毒感染因素的单因素分析
腹泻是一种急性胃肠道传染病，其主要传播途径为粪-口传播，儿童是主要的易感人群；
是一种严重危害儿童健康的疾病，是影响儿童健康发育的主要因素[3]。在连续11 年对南昌市5 岁以下腹泻患儿粪便标本检测结果分析显示，2 岁以内儿童腹泻相关病原的检出率是最高的，这可能与低龄幼儿全身免疫系统发育不完善有关，与龚春华、龚四堂等文献报道相一致[4-6]。A 组轮状病毒和诺如病毒是引起5 岁以下儿童腹泻的主要病原体，但随着监测时间的增加发现每一年的病原普构成又存在一定的差异。2017 年只检出了A 组轮状病毒和星状病毒，其他病毒均未检出；
2018 年的主要病原体则是A 组轮状病毒和腺病毒；
2019 年的主要病原体则是诺如病毒和腺病毒。B 组轮状病毒和C组轮状病毒的检出率较少，而且自2015 年以后均没有检出，这说明其不是南昌市5 岁以下儿童腹泻的常见病原体，这与任增志等的文献报道相一致[3]，有文献报道B 组和C 组轮状病毒是成人腹泻的常见病原体[7-8]，因此在后续对儿童腹泻的监测中，并未对B 组和C 组轮状病毒进行监测。
A 组轮状病毒是引起儿童腹泻的主要病原体，但各年龄组的阳性率有显著性差异，1～2 岁组的阳性率最高，6 个月以内婴儿阳性率反而较低，这可能与6 个月以内婴儿有母传抗体的保护，对病毒有一定的抵抗力；
6 月后母传抗体慢慢降低，而自身的免疫系统又发育不完全抵抗力低下有关。A 组轮状病毒感染有明显的季节性，秋冬季发病率显著高于春夏季，冬季检出率高达43.2%；
这可能与冬季温度较低，有利于病毒长期存活有一定关系，这与国内外研究结果相一致[6，8-9]。
诺如病毒感染与性别、年龄和季节都有关系，在年龄分布上与轮状病毒相似，1～2 岁组的阳性率最高；
但是诺如病毒的高发季节则为夏季，与崔晓双、文献报道的秋季高发则不同[10]，与陈惠芳等[11]报道其流行没有明显的季节性分布也不相同；
这可能与监测病例的选择、当地的气候特点等因素有关。本研究重点是监测5 岁以下儿童的腹泻情况，并未对5 岁以上儿童及其他年龄组人群进行监测。诺如病毒的传染性强，有多种传播途径，可经人传人、食物和水传播和粪口途径等途径传播，人群聚集的地方易引起暴发；
诺如病毒全年均可检出，应加强南昌市诺如病毒的监测，全面掌握其流行规律及特点，诺如病毒的预防和防控提供数据支撑[12]。
腺病毒也是引起腹泻的一种常见病原体，可通过粪-口途径传播。本研究显示腺病毒的阳性率为6.78%，除2017 年外，其它年份均可检出，其感染性与季节性有关，春季为其高发季节。星状病毒也是一种引起腹泻的常见病原体，但检出率一直处于较低的水平，且冬季为其高发季节，年龄分布无统计学差异。扎如病毒只在2012、2013 和2016年有检出，且2016 年扎如病毒的检出率最高38.71%，并高于A 组轮状病毒29.03%，成为当年腹泻的主要病原体。但是扎如病毒在其他年份检出率很低或者未检出，很难掌握扎如病毒的流行特征，后续可以加强扎如病毒的监测，掌握其在南昌市的流行特点与规律。
随着监测研究的持续进行，发现的合并感染病例越来越多，也越来越受到人们的重视。本研究共发现124 例合并感染，占比高达14.22%；
明显高于陈惠芳等文献研究报道4.8%和刘志华等报道的10.4%[11-13]。合并感染对医生确定腹泻病原带来一定的困难，可开展腹泻多病原监测，为医生诊断提供处理依据。
综上所述，通过对南昌市2010 年5 月至2021年4 月的5 岁以下儿童腹泻监测研究发现，南昌市5 岁以下儿童腹泻的主要病原体是轮状病毒和诺如病毒，其次是腺病毒，星状病毒和扎如病毒一直维持在一个较低的检出水平；
通过本研究对南昌市腹泻症候群病原普构成有了全面的了解，为腹泻类疾病的防控及疫情的处置提供有效的数据支撑。