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蜂蜜中氯霉素残留检测研究进展

时间:2023-07-18 10:10:03 来源:网友投稿

王岩

摘 要:氯霉素是一种抗菌性能良好的广谱抗生素,但因其毒副作用严重,已被各国禁止在动物源性食品中使用,近年来蜂蜜中氯霉素残留超标情况屡见报道,可见蜜蜂养殖过程中氯霉素非法使用的现象仍然存在。基于此,本文综述了蜂蜜中氯霉素残留的检测方法及其研究进展,着重介绍了酶联免疫法、色谱和质谱联用法等,对其优缺点和发展趋势进行了展望,旨在为蜂蜜中氯霉素残留检测方法的选择和运用提供参考。

关键词:蜂蜜;氯霉素;残留;检测方法

Research Progress on Residue Analysis of Chloramphenicol in Honey

WANG Yan

(Baoji Food and Drug Inspection and Testing Center, Baoji 721000, China)

Abstract:
Chloramphenicol is a broad-spectrum antibiotic with good antibacterial properties. However, because of its serious toxic and side effects, chloramphenicol has been forbidden to be used in animal-derived food in many countries. In recent years, there are many news about chloramphenicol residue in honey. It suggests that the illegal use of chloramphenicol in bee farming industry still exists. Based on this, this article have summered the detection method and research progress of chloramphenicol residue in honey,such as immunoassays , GC-MS, LC-MS, etc, And their advantages, disadvantages and development trends are prospected, in order to provide reference for the selection and application of chloramphenicol residue detection method in honey.

Keywords:
honey; chloramphenicol; residue; detection method

蜂蜜作为一种天然的营养佳品,含有糖类、蛋白质、氨基酸、维生素等多种营养成分,不仅能够补充日常所需营养,还能起到润肺止咳、消积通便等作用,是一款老少咸宜的滋补品,越来越受到人们的青睐。

氯霉素是首次用化学合成法生产的广谱抗生素,对于革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌具有很好的抑制作用,由于其效高价廉,曾经在兽医临床上被广泛使用,用于治疗和控制蜜蜂、家畜家禽、水产品养殖过程中的传染性疾病[1]。近年来的研究表明,氯霉素在动物体内代谢缓慢,有抑制骨髓造血功能等危害[2],毒副作用严重,因此各国已禁止氯霉素在動物源性食品中使用。

1 蜂蜜中氯霉素残留现状及限量要求

近年来,随着人们生活水平的提高,蜂蜜的需求量逐年增加,蜜蜂养殖产业发展已成规模,蜂蜜的品质安全是该产业能否持续健康发展的决定性因素,而蜂蜜中氯霉素的残留超标情况已经成为人们关注的焦点[3]。

1994年,联合国粮农组织就禁止在食用性动物养殖中使用氯霉素[4],我国食品安全国家标准要求蜂蜜中不得检出农兽药残留,中华人民共和国农业农村部公告第250号要求禁止在食品动物中使用氯霉素。尽管如此,在蜂蜜中检出氯霉素残留超标的现象仍然存在。2016—2019年,陕西省蜂蜜中氯霉素检出阳性率为2.44%[5]。2016—2017年,云南省蜂蜜中氯霉素检出阳性率为30.3%[6]。由此可见,蜂蜜中氯霉素残留超标情况不容忽视。

2 蜂蜜中氯霉素残留检测常见方法

目前,蜂蜜中氯霉素残留检测常见的方法有微生物法、免疫分析法、色谱法和其他新技术等。

2.1 微生物法

微生物法是利用氯霉素对特定菌株的抑菌作用来筛查食品中是否含有氯霉素的方法,常见的检验方法有杯碟法、棉签法、纸片法、琼脂扩散法等[7]。其中,棉签法在实践中应用最为广泛,方法是用棉签蘸取动物源食品样本的组织液,将其放在涂满枯草杆菌的培养基中保温过夜,观察四周是否出现抑菌圈,若出现则表明样本中含有氯霉素残留。该方法简便易行,耗时较短,但特异性和灵敏度较差,对所有的抗生素均有此反应。杯碟法与棉签法相比,能排除一些抗生素的干扰,如青霉素、土霉素等,特异性更强,灵敏度更高,检出限可达0.25 mg·kg-1[8]。

2.2 免疫分析法

免疫分析法是一种利用抗原抗体特异性结合,且具有可逆性的氯霉素检测方法,常见的检测方法有酶联免疫法、胶体金免疫层析技术、放射免疫分析法等。

酶联免疫法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是检测蜂蜜中氯霉素的主要分析方法,其原理是将氯霉素与大分子载体蛋白结合制成人工抗原,与抗体进行特异性反应,形成酶标记的抗原抗体复合物,在酶的催化作用下,使底物水解产生一种有色物质,根据特定波长下有色物质吸光度和氯霉素浓度制成标准曲线来测定其含量的一种方法。刘桃[9]等以抗氯霉素单克隆抗体为抗原,氯霉素-辣根过氧化物为标记物建立了直接竞争酶联免疫吸附法测定蜂蜜样品中氯霉素,检出限为0.15 ng·g-1,回收率在97.58%~100.94%,批内和批间变异系数均小于11%,表明方法稳定且准确度高。

杨娟等[10]利用胶体金免疫快速检测试纸条检测蜂蜜中氯霉素残留,整个过程只需25 min,准确率高达99.5%。许胜男[11]等建立了磁固相萃取前处理和胶体金免疫层析试纸条联用技术,检测蜂蜜中氯霉素残留,检出限为0.2 ng·g-1,不但降低了检测成本,还具有操作简便、快捷等特点,具有良好的应用前景。

陈小雪等[12]用放射免疫分析法检测食品中氯霉素残留量,最低检测限为0.15 μg·kg-1,方法准确、选择性高。但因其具有明显的放射性污染源,会对周围的人员和环境造成危害,使用较为局限。

2.3 色谱法和色谱-质谱联用法

色谱法和色谱-质谱联用法是利用不同的色谱柱,对样品中的氯霉素残留先分离后检测的一种检测方法,常见的有高效液相色谱法、气相色谱质谱联用法、液相色谱质谱联用法。

高效液相色谱法是以液体为流动相,利用高压输液系统,使样品在色谱柱中进行分离后检测的一种分析方法,具有灵敏度高、分离速度快、可靠性高等特点。徐丽艳[13]等用Oasis HLB固相萃取柱净化,乙酸乙酯提取的方法,采用高效液相色谱法检测蜂蜜中氯霉素残留,检测限为0.1 mg·kg-1。肖婉娜[14]等建立了高效液相色谱法检测蜂蜜中氯霉素的方法,检出限为0.625 μg·kg-1,在0.10~10.00 μg·mL-1线性关系良好。

气相色谱质谱联用法是以气相色谱作为进样和分离系统,质谱为检测系统的一种分析方法,既具有气相色谱法快速高效的特点,又能利用质谱检测器进行定性鉴定和结构分析,是一种比较成熟的分析方法。主要采用EI源(电子轰击源)和NCI源(负离子化学源),其中NCI源气相色谱质谱法的检出限可以达到0.1 μg·kg-1[15]。有研究表明,采用气相色谱质谱联用法检测蜂蜜中氯霉素,回收率可达83%~104%,检出限为0.05 μg·kg-1,定量限为0.2 μg·kg-1[16]。

液相色谱质谱联用法是以液相色谱为分离系统,质谱为检测系统的蜂蜜中氯霉素残留常见的检测方法,也是食品安全国家标准GB/T 18932.19—2003、GB 31658.2—2021等规定的蜂蜜、动物性食品中氯霉素残留法定的检测方法,具有准确度高、灵敏度高、选择性强等特点,常与固相萃取、分子印迹、QuEChERS等净化方法联用,以去除蜂蜜中的基质干扰,提高检测效率。于浩洋等[17]采用MCX固相萃取柱净化,建立超高效液相色谱质谱联用法测定蜂蜜中氯霉素残留,检出限为0.08 μg·L-1,回收率可达102.7%~105.6%。赵军溪等[18]采用全自动固相萃取超高效液相色谱质谱联用法测定蜂蜜中氯霉素残留,检出限可达0.05 μg·kg-1。李正元等[19]建立了QuEChERS提取与高效液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中氯霉素残留,解决了固相萃取法前处理过程中固相萃取柱堵塞的问题,在0.5~200.0 μg·L-1范围内线性关系良好,回收率可达81%~120%,简便快捷,灵敏度高。

2.4 其他新技术

表面增强拉曼散射法是一种新型的氯霉素检测方法,其原理是利用吸附在粗糙金属表面分子的拉曼散射信号可被放大这一特性,以金、银、铜纳米粒子等作为基底,检测食品中的氯霉素残留。孙文等[20]利用自聚合法合成的金纳米粒子,将氯霉素分子通过氢键吸附在其基底上,优化激发光波长,实现了对蜂蜜中氯霉素分子的高灵敏度检测,检测限可达10-10 mol·L-1,回收率在88.00%~101.12%,方法快速简便,准确率高。

生物传感器法又称生物芯片法,是利用生物分子之间的相互反应将其转化为光信号、电信号等进行检测的一种方法。FERGUSON等[21]采用表面等离子共振生物传感器法检测蜂蜜中氯霉素残留,检出限为0.02 g·kg-1。

毛细管电泳法是利用带电组分在高压电场中迁移效率不同而进行分离的检测方法。分离速度快,分析成本低,但测定低限较高,陈天豹等[22]采用毛细管电泳法结合紫外检测器检测蜂蜜中氯霉素残留,回收率大于89.6%,但检测限仅为10 μg·L-1,灵敏度较差,无法满足低浓度氯霉素残留的检测。

3 结语

从近几年对蜂蜜中氯霉素残留检测情况来看,尽管我国早已禁止在食用性动物中使用氯霉素,但是仍在陜西、云南、深圳[23]等地蜂蜜中检出氯霉素超标,说明蜜蜂养殖业依然存在非法使用氯霉素的现象。目前随着科技的进步和检测水平的提高,在蜂蜜和其他食品中氯霉素的检测方法有很多,其中酶联免疫法、气相色谱质谱联用法、液相色谱质谱联用法是比较常见的几种分析方法,也是食品安全国家标准规定的法定检测方法,具有灵敏度高,准确度好和回收率高等特点。但同时也存在一些不足,如酶联免疫法容易出现假阳性,色谱质谱联用法前处理较为烦琐,所需仪器成本较高。因此,在今后的研究中,应重点克服和解决酶联免疫法和色谱质谱联用法中存在的问题,以期建立一种简便高效、灵敏度高、使用成本较低的蜂蜜中氯霉素检测方法。

参考文献

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