孙雨晴 桂祖卿 孙菲菲 韩晓 宗浩 杜咏梅
摘 要：为探究顺-冷杉醇诱导烟草抗青枯病的适宜处理条件和作用机制，采用盆栽接种方法，研究了顺-冷杉醇灌根施用的适宜浓度、时间间隔和次数，测定了顺-冷杉醇处理后烟草根部主要防御酶活性、植保素和植物激素含量的变化，利用高通量测序技术测定了顺-冷杉醇对烟草根系转录水平的影响。結果表明，顺-冷杉醇施用浓度60～80 mg/L对烟草青枯病的防效为54.50%～57.10%，与阳性对照中生菌素相当，其适宜施用时间间隔为3～6 d，连续施用2～3次；
顺-冷杉醇处理后1～6 d烟草根部过氧化氢酶（CAT）、多酚氧化酶（PPO）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性显著提高，1～10 d过氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）活性显著提高，处理后3～6 d多酚类物质和木质素含量显著增加，1～3 d茉莉酸（JA）和水杨酸（SA）含量显著增加，引起烟草根部抗性基因NtSIPK、NtMEK2、NtMAPK、NtPAL和NtC4H上调表达，提高烟株对青枯病的抗性。由此可知，顺-冷杉醇可作为诱抗剂有效防控烟草青枯病的发生。
关键词：顺-冷杉醇；
烟草；
青枯病；
诱导抗性
中图分类号：S435.72 文献标识码：A 文章编号：1007-5119（2023）02-0066-08
Abstract：
In order to explore the appropriate treatment conditions and the mechanism of cis-abienol to induce tobacco against bacterial wilt， the suitable root application concentration， time interval and frequency were investigated by pot inoculation， combined with determination of the changes of major defense enzyme activities， phytoalexin and phytohormone contents in tobacco roots after cis-abienol treatment. Additionally， the effect of cis-abienol on the transcript level of tobacco roots was evaluated using high-throughput sequencing technology. The results showed that the control efficiency of cis-abisol at 60-80 mg/L against tobacco bacterial wilt was 54.50%-57.10%， which was comparable to that of bacteriocin in positive control. The suitable application interval was 3-6 days and 2-3 times. The activities of catalase （CAT）， polyphenol oxidase （PPO） and phenylalanine aminolyase （PAL） were significantly increased at 1-6 d after cis-abienol treatment， and the activities of peroxidase （POD） and superoxide dismutase （SOD） were significantly increased at 1-10 d， while the contents of polyphenols and lignin were significantly increased at 3-6 d after cis-abienol treatment. The contents of jasmonic acid （JA） and salicylic acid （SA） were significantly increased at 1-3 d， which cause the up-regulated expression of NtSIPK， NtMEK2， NtMAPK， NtPAL and NtC4H， thereby improving the resistance of tobacco plants against bacterial wilt. Therefore， cis-abienol could be used as bacterial wilt inducers to effectively control the occurrence of tobacco bacterial wilt.
Keywords：
cis-Abienol; tabacco; bacterial wilt; induced resistance
烟草青枯病是由青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）侵染引起的一种细菌性土传病害，在我国多个烟区均有发生，严重影响烟叶的产量与品质。目前，尚无有效抗青枯病的烟草品种[1-2]，化学药剂的过度使用则给环境造成污染[3]，而微生物本身的多样性和不同的适应能力，使生物防治效果难以把控[4]。
诱导抗病技术具有安全性、系统广谱性和持效性，为控制作物病害提供了新思路、新途径[5]。诱抗剂可通过刺激植物，增强其抗氧化代谢，引起次生代谢产物积累来提升其抗病能力。余峰等[6]发现橙皮素对烟草青枯病的防效达51.74%，可显著提高烟草叶片过氧化物酶（POD）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）的活性以及烟株次生代谢产物中酚类化合物含量。赵世元等[7]发现黄腐酸能诱导烟草超氧化物歧化酶（SOD）和多酚氧化酶（PPO）活性提高，并引起水杨酸和乙烯信号传导途径相关基因过表达，提升烟草对青枯病的抗性。
顺-冷杉醇（cis-Abienol）是烟草表面腺毛分泌的含量最丰富的赖百当二萜，主要存在于香料烟、晒烟、雪茄烟中[8]。Seo等[9]将顺-冷杉醇施用于烟草、番茄和拟南芥根部，可抑制其青枯病的发生。但顺-冷杉醇诱导烟草对青枯病抗性的作用机制及其适宜的施用方式还需深入探讨。本研究拟通过盆栽接种试验，在明确顺-冷杉醇诱导烟草青枯病抗性的适宜施用浓度、时间间隔及施用次数条件下，进一步研究顺-冷杉醇对烟草防御酶活性、多酚类物质和木质素含量以及防御相关基因表达的影响，初步探究顺-冷杉醇诱导烟草青枯病抗性的机制，为顺-冷杉醇作为青枯病诱抗剂在烟草生产中的应用提供研究基础。
1 材料与方法
1.1 供试材料
1.1.1 供试烟草材料 供试烤烟品种为红花大金元，由国家烟草种质资源中期库（青岛）提供。采用常规育苗方式进行育苗和假植，待生长至3片真叶时，移栽入装满营养土的花盆（直径120 mm×高165 mm）中，放置于自然光照的温室大棚中生长。
1.1.2 供试青枯菌 青枯雷尔氏菌悬液（Ralstonia solanacearum，–80 ℃冰箱保存）由中国农业科学院烟草研究所遗传育种中心提供。取100 μL青枯菌悬液于NA培养基中，置于28 ℃恒温培养箱培养36 h。挑取NA培养基中青枯菌单菌落于NB培养基中，置于摇床28 ℃，200 r/min培养至OD600=0.1（约为1×108 CFU/mL），待用。
1.1.3 供试试剂 顺-冷杉醇由本实验室分离纯化，高效液相色谱测定纯度>95%；
中生菌素购于福建凯立生物制品有限公司；
营养琼脂（NA）、营养肉汤（NB）培养基、霍格兰营养液购于北京索莱宝科技有限公司；
POD、CAT、PPO、SOD、PAL酶活测定试剂盒购于上海生工生物工程股份有限公司；
SA、JA含量检测试剂盒购于上海艾比玛特医药科技有限公司；
cDNA反转录试剂盒购自TaKaRa公司。
1.2 试验方法
1.2.1 顺-冷杉醇施用浓度试验 顺-冷杉醇设置20、40、60、80 mg/L等4个浓度，以60 mg/L中生菌素（Zhongshengmycin）为阳性对照，清水为阴性对照，共6个处理，每处理4次重复，每重复12株烟苗，随机区组排列。待烟草长至六叶一心期，用清水、中生菌素和不同浓度顺-冷杉醇采用灌根的方式处理烟株，每株均为20 mL。施药后24 h将活化好的青枯菌接种液（1.1.2）接种于烟苗根部，每株10 mL，接种完成后，将烟苗置于28 ℃、光照14 h/d、相对湿度70%的人工气候室中生长，待清水对照的病情指数不再发生变化时，调查所有处理的烟株发病情况（按照GB/T 23222—2008）[10]，并计算病情指数和相对防效。
病情指数=[∑（各病级株数×病级数）/（最高病级×总株数）]×100
相对防效（%）=（对照病情指数-处理病情指数）/对照病情指数×100
1.2.2 顺-冷杉醇诱导烟草抗性最佳时间试验 用60 mg/L的顺-冷杉醇溶液灌根处理烟株，每株20 mL。分别于施药后1、3、6、10 d接种青枯病菌，每个接菌时间处理均设置相应的清水对照，共8个处理。接菌处理方式、温室环境以及病情调查同1.2.1。
1.2.3 顺-冷杉醇适宜施用次数试验 顺-冷杉醇施用浓度为60 mg/L，分别设置1、2、3次施药处理，每次施药间隔3 d，每次每株20 mL。以清水为阴性对照，共4个处理。接菌处理方式、温室环境以及病情调查同1.2.1。
1.2.4 顺-冷杉醇对烟草防御酶活性及防御活性物质的诱导效果试验 烟草移栽后长至六叶一心时，顺-冷杉醇设置2个浓度分别为20、60 mg/L进行灌根处理，以清水为对照，共3个处理，每处理3次重复，每重复60株烟苗，随机区组排列。施药后第1、3、6、10、15天取各重复中长势大致相同的4株烟苗，蒸馏水洗净根部，放入液氮保存，用于防御酶活性和防御活性物质测定。
防御酶活性利用POD、CAT、PPO、SOD、PAL酶活测定盒测定；
烟草多酚类化合物（芸香苷、莨菪亭、咖啡酸）含量测定参照标准YC/T 202—2006
《烟草及烟草制品 多酚类化合物绿原酸、莨菪亭和芸香苷的测定》[11]进行；
木质素含量按照钟天秀等[12]的方法测定；
SA、JA含量利用Elisa检测试剂盒测定。
1.2.5 烟草转录组测序及结果验证 采用王勇等[13]的方法進行烟草水培处理，待长至六叶一心时，以60 mg/L顺-冷杉醇处理，清水为对照，每处理3次重复，每重复6株苗，随机区组排列。施药后24 h，每重复取1株烟苗根部，蒸馏水冲洗干净，吸水纸吸干立即存入液氮保存。
样品RNA提取以及转录组学测序分析相关工作由北京诺禾致源公司承担。
使用诺禾致源公司返回的样品RNA，进行cDNA反转录，筛选出转录组测序结果中显著富集通路里与抗病性相关的5个差异基因，以actin为内参基因，通过实时荧光定量（qRT-PCR）和2?ΔΔCt方法计算基因的相对表达[6]。
1.3 数据统计
用SPSS 19.0进行数据统计分析，采用Duncan新复极差法分析数据显著性，p<0.05为显著差异，并利用Origin2021画图。
2 结 果
2.1 顺-冷杉醇施用方式对烟草青枯病抗性的诱导效果
2.1.1 顺-冷杉醇施用浓度对烟草青枯病抗性的影响 如图1所示，在20～80 mg/L浓度范围内，随着顺-冷杉醇施用浓度的增加，烟株青枯病的病情指数呈显著下降趋势，对青枯病的防治效果呈上升趋势。60和80 mg/L顺-冷杉醇对烟草青枯病的防效达到54.50%～57.10%，略高于阳性对照中生菌素，但差异不显著。因此，顺-冷杉醇适宜施用浓度为60～80 mg/L。
2.1.2 顺-冷杉醇对烟草青枯病诱导抗性最佳的时间 施用顺-冷杉醇活化烟株后，再设置不同时间接种青枯菌，结果表明（图2），随着青枯菌接种时间的推后，烟株青枯病的病情指数呈现先下降后上升趋势。在预先施入顺-冷杉醇后3～6 d接种青枯菌的处理，发病程度最低、防治效果最好，防效达到53.65%～56.62%。因此，通过施用顺-冷杉醇预防青
枯病，获得最佳诱导效果的时间为3～6 d。
2.1.3 顺-冷杉醇施用次数对烟草青枯病抗性的影响 如图3所示，随着顺-冷杉醇施用次数的增加，烟株青枯病的病情指数呈下降趋势，对青枯病的防治效果呈上升趋势；
诱导2次和3次产生的防效差异不显著，分别为56.27%和60.52%，且显著高于1次处理。因此，顺-冷杉醇适宜施用次数为2～3次。
2.2 顺-冷杉醇对烟草根部防御酶活性及防御活性物质的影响
2.2.1 对防御酶活性的影响 如图4所示，顺-冷杉醇处理后1 d烟草根部防御酶活性均显著增加，呈现明显的剂量-效应关系，60 mg/L顺-冷杉醇处理的酶活增加倍数要高于20 mg/L处理。不同酶活性增加持续时间不同：烟草根部CAT、PPO和PAL活性在施药后1～6 d显著高于清水对照，60 mg/L顺-冷杉醇处理后CAT酶活在第1天时最高，比对照高1.51倍；
PPO活性在第3天时最高，比对照高1.60倍，PAL活性在第3～6天时维持较高活性，比对照高1.23～1.45倍。POD和SOD活性在施药后1～10 d显著高于清水对照，POD酶活性在15天时降至与对照一致；
SOD活性在第3天时最高，比对照高1.40倍。
2.2.2 对多酚类化合物和木质素含量的影响 如图5所示，与清水对照相比，煙草根部芸香苷、咖啡酸、莨菪亭及木质素含量在顺-冷杉醇处理后的15 d内均有所增加，且呈现明显的剂量-效应关系。顺-冷杉醇处理的烟草根部咖啡酸含量在1～3 d时显著高于对照；
芸香苷含量在3～15 d显著高于对照，在第3天时达到最高，比对照高1.56倍；
莨菪亭含量在3～10 d时显著高于对照，在第6天时达到最高，比对照高1.42倍；
苯丙烷代谢产物木质素的含量则呈现持续上升的趋势，在第3天时高于对照1.60倍，而后在3～15 d时均维持较高水平，显著高于对照处理。由此可知，顺-冷杉醇处理的烟株植保素含量在3～6 d内保持较高水平，此时烟株对青枯病的抗性较高，且以60 mg/L的浓度处理效果更优。
2.2.3 对植物激素含量的影响 如图6所示，60 mg/L顺-冷杉醇处理的烟草根部茉莉酸（JA）、水杨酸（SA）含量高于20 mg/L的处理，且在1～6 d和1～3 d时分别显著高于对照1.47～2.01倍和1.32～1.35倍，JA含量的增加倍数和持续时间均大于SA。
2.3 顺-冷杉醇处理烟草的转录组学分析
2.3.1 差异表达基因统计与富集分析 图7A表明，在DESeq2 p<0.05和∣log2FoldChange∣>1 条件下，得到21650个差异表达基因（DEGs），其中8853个DEGs上调，12797个DEGs下调。为了解这些DEGs参与的代谢途径，将全部序列与KEGG数据库进行对比发现（图7B），显著富集通路主要涉及类黄酮代谢、苯丙烷类化合物的合成、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号级联反应、氨基酸代谢以及生物碱类物质代谢等。
2.3.2 转录组测序结果验证 根据转录组中显著富集通路的结果，筛选出与烟草抗病性相关的NtSIPK、NtMEK2、NtMAPK、NtPAL和NtC4H基因进行表达量差异验证。如图8所示，顺-冷杉醇施用后1 d烟草根部与抗病防御相关的5个基因均上调表达。调控ROS代谢平衡相关基因NtSIPK，MAPK级联反应相关的NtMEK2和NtMAPK，植物激素以及苯丙烷代谢途径相关合成基因NtPAL和NtC4H的相对表达水平显著上调，与转录组测序结果一致，说明测序结果可信。
3 讨 论
本研究发现，顺-冷杉醇60～80 mg/L浓度处理对烟草青枯病的防治效果为54.50%～57.10%，与阳性对照中生菌素相当。已有研究表明，诱导剂苯并噻二唑和2，6-二氯异烟酸诱导烟草青枯病抗性的最适浓度为200 mg/L[14]，核黄素为400 mg/L[15]，SA为500 mg/L[16]，莨菪亭为125 mg/L[17]，相比上述报道，顺-冷杉醇的最适诱导浓度更低，诱导活性更高，具有较好的开发价值。
本研究结果显示，顺-冷杉醇处理后引起烟草根中ROS合成相关基因NtSIPK上调表达[18-19]，以及抗氧化相关酶CAT、POD和SOD活性的上升。ROS对植物抗病性起着重要作用，植株经诱导后，可迅速积累ROS并引发早期信号传递，启动抗病反应。研究发现黄腐酸和莨菪亭等诱抗剂[7，17]，可引起烟草相关抗氧化酶活性提高，致使ROS含量上升并且作为信号物质参与植物对病菌侵染的防御反应。推测顺-冷杉醇处理可通过调节体内ROS含量将诱导信号传递至细胞内。
MAPK级联信号在植物诱导抗性中发挥重要作用，可以将由ROS含量变化引起的胞内信号传递至细胞核，能够磷酸化不同的效应蛋白以作用于转录因子从而调控基因的表达[20-21]。前人研究发现拟南芥中AtMAPK对于诱导抗病性至关重要[22]，本研究中顺-冷杉醇诱导后的烟草根部MAPK级联反应基因NtMAPK上调表达，由于NtMAPK和AtMAPK同源，因此推测MAPK级联反应信号同样引起细胞内后续抗病基因表达，参与顺-冷杉醇诱导的烟草抗青枯病防御。
植物激素JA和SA参与植物抗病过程并诱导植物系统抗性的产生。JA参与多酚、木质素等植株防御反应关键物质的合成，SA可通过激活植物过敏反应抑制青枯病的发生[23-24]，SA、JA的信号传导途径成员能够相互影响，存在一定程度交流[25]。本研究中，顺-冷杉醇诱导烟草根中JA含量的增加幅度远大于SA，且持续增加时间长于SA。原因可能是顺-冷杉醇诱导的烟草青枯病抗性模式主要依赖于JA介导的信号传递，SA的含量增加则是由于SA和JA信号途径的相互影响，与Seo等[9]、Zhao等[26]结果类似。SA和JA信号的共同传递，不仅引发了烟株对病菌侵染的短期防御，还通过增强烟株生理代谢来提高对青枯病的长期抗性。
NtPAL和NtC4H是苯丙烷代谢途径关键酶基因，PAL和PPO在苯丙烷类化合物代谢途径中起重要作用，参与酚类化合物和木质素等植保素的合成[27]。本研究结果表明，顺-冷杉醇可诱导烟草根部NtPAL和NtC4H上调表达，促进PAL、PPO活性上升，导致苯丙烷代谢的产物芸香苷、咖啡酸、莨菪亭和木质素含量在处理后3～6 d达到较高水平，有助于增加细胞壁厚度和组织木质化程度，从而提高烟株对青枯菌入侵的抵抗能力，不同接菌时间间隔试验结果（2.1.2）也显示3～6 d时，烟草对青枯病的抗病能力达到最佳。
本文在盆栽接种条件下，研究了顺-冷杉醇灌根施用对烟草青枯病的防效，并初步探索了其作用机制。但顺-冷杉醇在大田生产条件下诱导烟草对青枯病抗性的效果还需深入研究与验证。
4 结 论
研究表明，顺-冷杉醇诱导烟草抗青枯病的适宜施用条件为浓度60～80 mg/L，时间间隔3～6 d，处理2～3次。顺-冷杉醇灌根处理可显著提升烟草根部防御酶系CAT、POD、SOD、PPO、PAL活性与植物激素JA、SA的含量，使得多酚类物质和木质素的含量显著增加，同时提高ROS合成（NtSIPK）、MAPK级联反应（NtMEK2和NtMAPK）、苯丙烷代谢途径（NtPAL和NtC4H）相关防御基因表达水平，增强了烟草抵御青枯病菌感染的能力。此结果为烟草顺-冷杉醇作为青枯病诱抗剂的进一步开发及产业化应用提供研究基础。
参考文献
[1]孔凡玉. 烟草青枯病的综合防治[J]. 烟草科技，2003（4）：42-43，48.
KONG F Y. Integrated control of tobacco bacterial wilt disease[J]. Tobacco Science & Technology， 2003（4）：
42-43， 48.
[2]王新，吴新儒，王卫锋，等. 烟草抗青枯病突变体的室内接种鉴定[J]. 分子植物育种，2018，16（19）：6468-6475.
WANG X， WU X R， WANG W F， et al. Indoor inoculation identification of tobacco mutants resistant to bacterial wilt[J]. Molecular Plant Breeding， 2018， 16（19）：
6468-6475.
[3]崔晓东，王伊玲，李红霞，等. 杀菌剂与无致病力烟草青枯菌对噬菌体存活的影响[J]. 中国烟草科学，2022，43（1）：55-60.
CUI X D， WANG Y L， LI H X， et al. Effects of bactericides and Ralstonia Solanacearum avirulent strain on phage survival[J]. Chinese Tobacco Science， 2022， 43（1）：
55-60.
[4]FAUJIWARA A， FUJISAWA M， HAMASAKI R， et al. Biocontrol of Ralstonia solanacearum by treatment with lLytic bacteriophages[J]. Applied and environmental microbiology， 2011， 77（12）：
4155-4162.
[5]鄧一文，刘裕强，王静，等. 农作物抗病虫研究的战略思考[J]. 中国科学：生命科学，2021，51（10）：1435-1446.
DENG Y W， LIU Y Q， WANG J， et al. Strategic thinking and research on crop disease and pest resistance in China[J]. Scientia Sinica：
Vitae， 2021， 51（10）：
1435-1446.
[6]余峰，李洁，黎妍妍，等. 橙皮素对烟草青枯病的诱导抗性研究[J]. 中国烟草科学，2022，43（4）：55-61.
YU F， LI J， LI Y Y， et al. Study on the effect of hesperetin on the induction of tobacco resistance to bacterial wilt[J]. Chinese Tobacco Science， 2022， 43（4）：
55-61.
[7]赵世元. 黄腐酸诱导烟草抗青枯病的活性及初步机理研究[D]. 重庆：西南大学，2020.
ZHAO S Y. Research on preliminary mechanism of resistance to tobacco bacterial wilt induced by fulvic acid[D]. Chongqing：
Southwest University， 2020.
[8]黄婷婷，王静，符云鹏. 烟草赖百当二萜代谢调控机制研究进展[J]. 中国烟草学报，2019，25（1）：105-110.
HUANG T T， WANG J， FU Y P. Research progress on metabolic regulation mechanism of labdane diterpenes in tobacco[J]. Acta Tabacaria Sinica， 2019， 25（1）：
105-110.
[9]SEO S， GOMI K， KAKU H， et al. Identification of natural diterpenes that inhibit bacterial wilt disease in tobacco， tomato and arabidopsis[J]. Plant & Cell Physiology， 2012， 53（8）：
1432-1444.
[10]国家烟草专卖局. 烟草病虫害分级调查方法：GB/T 23222—2008[S]. 北京：中国标准出版社，2008.
State Tobacco Monopoly Administration. Grade and investigation method of tobacco diseases and insect pests：
GB/T 23222—2008[S]. Beijing：
Standards Press of China， 2008.
[11]国家烟草专卖局. 烟草及烟草制品 多酚类化合物绿原酸、莨菪亭和芸香苷的测定：YC/T 202—2006[S]. 北京：中国标准出版社，2006.
State Tobacco Monopoly Administration. Tobacco and tobacco products-determination of polyphenols-chlorogenic acid，scopoletin and rutin：
YC/T 202—2006[S]. Beijing：
Standards Press of China， 2006.
[12]钟天秀，李有涵，李菲，等. 华南象草Pp4CL基因的克隆及其转基因烟草木质素含量分析[J]. 西北植物学报，2015，35（12）：2355-2364.
ZHONG T X， LI Y H， LI F， et al. Isolation of 4-coumarate CoA Ligase gene from pennisetum purpureum cv.Huanan and lignin content analysis of transgenic tobacco plants[J]. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica， 2015， 35（12）：
2355-2364.
[13]王勇，李廷轩，陈光登，等. 不同钾基因型烟草钾吸收和生理生化特性研究[J]. 中国烟草科学，2017，38（5）：56-61.
WANG Y， LI T X， CHEN G D， et al. Study on K absorption and physiological and biochemical characteristics of different K-efficiency tobacco genotypes[J]. Chinese Tobacco Science， 2017， 38（5）：
56-61.
[14]郭慶明，徐笑宇，陈永明，等. 几种诱抗剂诱导烟草抗青枯病效果及其与链霉素混用增效作用[J]. 农药，2012，51（8）：608-610.
GUO Q M， XU X Y， CHEN Y M， et al. Several inducers induced the resistance of tobacco to bacterial wilt and synergistic effect mixed with streptomycin[J]. Agrochemicals， 2012， 51（8）：
608-610.
[15]江厚龙，李鹏，李钠钾，等. 外源诱抗剂对烟草青枯病的诱抗效果研究[J]. 中国农学通报，2014，30（28）：286-290.
JIANG H L， LI P， LI N J， et al. Inhibition effects of induced resistance on tobacco resistance to Ralstonia solanacearum[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin， 2014， 30（28）：
286-290.
[16]程小龙. 外源水杨酸诱导烟草抗青枯病的作用及机理研究[D]. 重庆：西南大学，2014.
CHENG X L， Foreign salicylic acid induced resistance to bacterial wilt of tobacco in control efficiency and mechanism faction[D]. Chongqing：
Southwest University， 2014.
[17]崔伟伟. 东莨菪内酯诱导烟草对青枯病的抗性及其作用机理研究[D]. 重庆：西南大学，2014.
CUI W W. Induced resistance and mechanism of tobacco against Ralstonia Solanacearum by scopoletin[D]. Chongqing：
Southwest university， 2014.
[18]WASZCZAK C， CANRMODY M， KANGASJARVI J. Reactive oxygen species in plant signaling[J]. Annual Review Plant Biology， 2018， 29（69）：
209-236.
[19]MARCUS A， BRIAN E. Double Jeopardy：
both overexpression and suppression of a redox-activated plant mitogen-activated protein kinase render tobacco plants ozone sensitive[J]. The Plant Cell， 2022， 14（9）：
2059-2069.
[20]尹兵兵，潘凌云，付畅. 逆境下植物MAPK级联途径基因的表达调控[J]. 分子植物育种，2022，20（10）：3257-3265.
YIN B B， PAN L Y， FU C. Regulation of gene expression of plant MAPK cascade pathway under environmental stresses[J]. Molecular Plant Breeding， 2022， 20（10）：
3257-3265.
[21]ZHOU J M， ZHANG Y. Plant immunity：
danger perception and signaling[J]. Cell， 2020， 181（5）：
978-989.
[22]MEMG X， ZHANG S. MAPK cascades in plant disease resistance signaling[J]. Annual Review of Phytopathology， 2013， 51：
245-266.
[23]HIDEO F， NNAKASHITA A B， MICHIKO Y， et al. Probenazole induces systemic acquired resistance in tobacco through salicylic acid accumulation[J]. Physiological and Molecular Plant Pathology， 2002， 61（4）：
197-203.
[24]LIU Y， LIU Q， TANG Y， et al. NtPR1a regulates resistance to Ralstonia solanacearum in Nicotiana tabacum via activating the defense-related genes[J]. Biochemical And Biophysical Research Communications， 2019， 508（3）：
940-945.
[25]姜倪皓. 硅介導番茄青枯病抗性的生理与转录调控机理[D]. 广州：华南农业大学，2019.
JIANG N H. Physiological and transcriptional regulation mechanism of Silicon-mediated resistance of tomato to Ralstonia solanacearum[D]. Guangzhou：
South China Agricultural University， 2019.
[26]ZHAO P， LIU L， CAO J， et al. Transcriptome analysis of tryptophan-induced resistance against potato common scab[J]. International Journal of Molecular Science， 2022， 23（15）：
8420.
[27]FUJIMOTO T， MIZUKUBO T， ABE H， et al. Sclareol induces plant resistance to root-knot nematode partially through ethylene-dependent enhancement of lignin accumulation[J]. Molecular Plant Microbe Interact， 2015， 28（4）：
398-407.