况 漫 朱贵娟 马亚琳
湖北省十堰市人民医院(442000)
宫颈上皮内病变是宫颈浸润癌前病变，与其发生发展密切相关[1]。宫颈病变发展至宫颈癌前及时发现并给予有效干预具有重要意义[2-3]。人乳头瘤病毒(HPV)可引发不同性质的肿瘤[4]。SLC5A8基因是2002年被发现，近些年研究认为其表达在肿瘤发生中意义重要[5]。RASSF2A基因是RAS相关结构域家族基因2的A转录本，是潜在肿瘤抑制基因，与多种肿瘤的发生有密切关系[6]。本研究对宫颈病患者临床资料进行分析，探究高危型HPV感染及SLC5A8、RASSF2A基因启动子甲基化在宫颈病变诊断中的临床价值。
1.1 一般资料
回顾性收集2018年5月-2021年5月本院收治的宫颈病变患者186例临床资料，年龄(48.0±5.3)岁(26～61岁)。纳入标准：①符合《宫颈病变的诊断与治疗》[7]中宫颈病变诊断标准；
②初次接受治疗；
③未合并其他恶性肿瘤。排除标准：①已接收放射或化疗药物治疗；
②妊娠期；
③资料不完整。根据阴道镜宫颈活检病理诊断结果，分为宫颈上皮内瘤变I级组(73例)、II级组(57例)、III级组(56例)，正常细胞为对照组(43例)。本研究经院伦理委员会审批。
1.2 宫颈细胞检测
1.2.1HBVDNA采用北京英硕力金柏科技有限公司的HBV DNA检测试剂盒，PCR扩增法检测。先将89μl扩增混合液与1μlTAQ酶配置PCR反应体系(100μl)。按照标记向每个PCR管内加入10μl对应的样本DNA或阳性对照控品。混匀，离心后收集。将已配备完成的PCR扩增体系加入适宜的PCR扩增仪内：50℃ 2min，64℃ 4min，94℃ 30s；
48℃ 45s，72℃ 20s，重复28个周期；
随后94℃ 30s，65℃ 45s，72℃ 20s，重复25个周期。随后4℃下完成反应。将扩增产物处理后在仪器检测，探针信号值≥40m阳性，<40m阴性。
1.2.2SLC5A8基因启动子采用上海英潍捷贸易有限公司的SLC5A8检测试剂盒，甲基化特异性PCR法检测。按照说明书提取样本DNA并修饰，SLC5A8甲基化上游引物为5"-TCGAACGTATTTCGAGGC-3"，下游引物为5"-ACAACGAATCGATTTTCCG-3"；
将对应的引物进行亚硫酸氢盐修饰DNA样本扩增：PCR在50℃ 2min，95℃ 2min；
95℃ 15s；
60℃ 30s，循环40次，对反应产物开始凝脂糖凝胶电泳。
1.2.3RASSF2A基因启动子甲基化采用北京天根生化科技公司试剂盒，按照DNA提取试剂盒说明书提取检测。收集1μgDNA溶于50μl水内，加入3mol/LNAOH溶液3.3μl，37℃下孵育15min；
加入10mmolL氢醌 30μl以及520μl的亚硫酸氢钠混匀，50℃水浴16h。经过碱基修饰后的DNA进行脱盐、纯化和回收。修饰后DNA开始聚合酶链反应，甲基特异性引物：5"-GTTCGTCGTCGTTTTTTAGGCG-3"以及5"-AAAAACCAACGAC-CCCCGCG-3"，扩增的片段为108bp，反应体积30μl，在95℃下预变性5min，在95℃下变性30s，58℃退火30℃，72℃延伸30s。连续35个周期，在72℃下再次延伸6min，PCR产物通过琼脂糖电泳，在溴化乙锭染色后在凝胶成像系统下观察。
1.3 观察指标
检测各组标本HPV DNA、SLC5A8以及RASSF2A基因启动子甲基化阳性率。
1.4 方法
2.1 各组标本HPV DNA阳性率对比
HPV DNA阳性率，对照组(0,0/43)、宫颈上皮内瘤变Ⅰ级组(28.8%,21/73)、Ⅱ级组(63.2%,36/57)、Ⅲ级组(92.9%,52/56)依次升高(χ2=54.358，P<0.001)。
2.2 各组标本SLC5A8基因启动子甲基化阳性率对比
对照组、Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组标本SLC5A8基因启动子甲基化及RASSF2A基因启动子甲基化阳性率均依次升高(均P<0.05)。见表1。
表1 各组基因启动子甲基化阳性率对比[例(%)]
宫颈病变为多重原因造成的宫颈部位发生病理性变化，包括感染、病原体入侵等引起的宫颈炎、宫颈肿瘤等[7-8]。导致宫颈病变的因素多种，病情程度可分为轻、中、重度，治疗不及时可能发展为宫颈癌，所以宫颈病变早期筛查与诊断极为重要[9-10]。
HPV是导致宫颈病变的危险因素，高危型HPV感染与宫颈癌的发生关系密切[11]。本研究结果显示，与对照组相比，子宫上皮内瘤病变I级、II级、III级组标本HPV DNA阳性率逐渐升高。SLC5A8基因是一种肿瘤抑制基因，该基因编码蛋白是一种细胞运载体，对乳酸、烟酸以及脂肪酸等进行转运，同时能对碘化物进行转运[12]。SLC5A8基因能够把丁酸运转到细胞内，且能发挥组蛋白脱乙酰基酶抑制剂的功能，在上皮细胞癌前病变中发挥重要作用，可促进肿瘤细胞的凋亡[13]。本研究结果显示，对照组、子宫上皮内瘤病变I级、II级、III级组标本SLC5A8基因启动子甲基化阳性率逐渐升高，说明SLC5A8基因启动子甲基化与宫颈病变发生发展有一定关系。RASSF2A基因在人体脑、胎盘以及血液中较高表达，含有多种转录本，同时启动子区域含有多种CpG岛，能够促进转录的甲基化[14-15]。本研究结果显示，对照组、子宫上皮内瘤病变I级、II级、III级组标本SLC5A8基因启动子甲基化阳性率逐渐升高。可能因为：RASSF2A基因可以激活caspase3引起细胞的凋亡，且能导致细胞周期阻滞在G1期，抑制上皮细胞瘤的增生[16]。
本次研究通过检测不同病变程度患者标本中高危型HPV感染及SLC5A8、RASSF2A基因启动子甲基化阳性表达率存在差异，提示上述检测指标在宫颈病变中可能发挥重要作用，为临床防治提供思路。
猜你喜欢内瘤甲基化上皮宫颈上皮内瘤变和宫颈癌患者的阴道微生态特点昆明医科大学学报(2021年8期)2021-08-13氟斑牙患儿ERα启动子区甲基化率与血钙和尿氟的相关性西南国防医药(2016年7期)2016-12-01LEEP术治疗宫颈上皮内瘤变的效果研究中国卫生标准管理(2015年5期)2016-01-14CXXC指蛋白5在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义中国癌症杂志(2015年4期)2015-12-0950例面颈部钙化上皮瘤误诊分析中国医疗美容(2015年1期)2015-07-12细菌性阴道病加速宫颈上皮内瘤变1例报告中国当代医药(2015年30期)2015-03-0182例伴高级别上皮内瘤变大肠腺瘤的临床特征研究中国当代医药(2015年8期)2015-03-01卵巢上皮性癌组织中PITX2和β-catenin蛋白的表达郑州大学学报（医学版）(2015年2期)2015-02-27SOX30基因在结直肠癌中的表达与甲基化分析癌变·畸变·突变(2015年3期)2015-02-27鼻咽癌组织中SYK基因启动子区的甲基化分析现代检验医学杂志(2015年2期)2015-02-06